投稿
  1. 商川网首页
  2. 知识百科

如何通过最新VE修改器快速提高文章质量

juju • • 知识百科



蛋白免疫印迹（Western blot，WB）以蛋白质为研究对象，先借助SDS-PAGE凝胶，将总蛋白按照不同的分子量大小进行分离，然后将胶上的蛋白质转移到膜上，再利用相应的特异性抗体对靶蛋白进行定量或定性检测的方法。



图1. Western blot 的实验流程图



（一）样本制备



样本制备时需要许多方位考虑，包括裂解液的选择，后续实验的应用等：



1、尽可能提取完全或降低样本复杂度，集中提取某个样本部位总蛋白，比如只提膜蛋白；



2、保持蛋白处于溶解状态（有针对性的对裂解液的pH盐浓度、表面活性剂、还原剂等的选择）；



3、提取蛋白过程防止降解、沉淀等（最好冰上操作，并加入适量的蛋白酶抑制剂20124ES或磷酸酶抑制剂20109ES）；



4、减少样本的粘稠度，去除核酸等分子（全能核酸酶20156ES或采取超声处理）；



5、细菌、真菌、植物细胞或者组织，还需要借助破壁的酶来进行蛋白提取。







表1. 常见的蛋白定量方法比较



（三）蛋白电泳



图4. 蛋白胶浓度分离蛋白分子的范围



蛋白胶类型选择，既可节省蛋白电泳时间，又可对电泳效率进行提高。



表2. 不同蛋白胶的组分组成及差异



（四）蛋白转膜



转膜即将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如NC膜）。蛋白转膜方法可大致分为湿转和半干转两种类型。用于Western blot的膜也有不同的类型及差异：



图8. 膜再生使用示意图



（八）结果分析



对于处理过或者是不同组织蛋白表达量的会涉及到量的变化，如何对这个表达量进行分析呢？此时借助不同软件，通过对Western blot的结果条带的灰度值计算，来做统计分析。比如比较简单的软件Image J可实现该功能：



图9. Image J软件使用截图（图片来源网络）



Image J软件，根据靶标蛋白以及内参蛋白的条带灰度，实现靶标蛋白的表达量分析。灰度的概念是使用黑色调表示物体，即用黑色为基准色，不同的饱和度的黑色来显示图像。采用ECL发光时，蛋白条带发出的荧光会曝光在胶片上，留下的黑色条带。



二、WB实验应用场景



定性分析：从总蛋白质中检测目标蛋白有无；



定量分析：以标准品为对照，定量确定组织或细胞中目的蛋白的表达情况；



实验研究：不同蛋白之间的相互关系、蛋白与核酸之间的相互关系；



应用互补：常配合ELISA来进一步分析蛋白功能（图10左）、免疫荧光IF对靶蛋白定位分析（图10右），以及配合流式FACs和组化IHC等技术共同研究。



图10. ELISA及免疫荧光IF 实验结果图（图片来源于网络）



三、蛋白免疫系列产品



部分高分文章







[1] Chen L, Yang Y, Bao J, et al. Autophagy negative-regulating Wnt signaling enhanced inflammatory osteoclastogenesis from Pre-OCs in vitro. Biomed Pharmacother. 2020;126:110093. RIPA 20101ES



[2] L, Li H, Su X, et al. Chlorzoxazone, a **all molecule drug, augments immunosuppressive capacity of mesenchymal stem cells via modulation of FOXO3 phosphorylation. Cell Death Dis. 2020;11(3):158. Published 2020 Mar 2. 磷酸酶抑制剂混合物 20109ES



[3] Yu D, Han GH, Zhao X, et al. MicroRNA-129-5p suppresses nasopharyngeal carcinoma lymph angiogenesis and lymph node metastasis by targeting ZIC2. Cell Oncol (Dordr). 2020;43(2):249-261. BCA蛋白定量 20201ES



[4] Xu P, Zou M, Wang S, et al. Construction and characterization of a truncated tissue factor?coagulation?based composite system for selective thrombosis in tumor blood vessels[J]. International journal of oncology, 2019, 55(4): 823-832. 三色蛋白marker 20351ES



[5] Song X, Gong Z, Liu K, Kou J, Liu B, Liu K. Baicalin combats glutamate excitotoxicity via protecting glutamine synthetase from ROS-induced 20S proteasomal degradation. Redox Biol. 2020;34:101559. ECL超敏显色液 36208ES

本文来自投稿，不代表商川网立场，如若转载，请注明出处：http://www.sclgvs.com/zhishi/62162.html

赞 (0)
jujujuju
0
上一篇 2023年 8月 9日 04:30:14
下一篇 2023年 8月 9日 04:30:17

相关推荐

版权声明：本文内容由互联网用户自发贡献，该文观点仅代表作者本人。本站仅提供信息存储空间服务，不拥有所有权，不承担相关法律责任。如发现本站有涉嫌抄袭侵权/违法违规的内容， 请联系我们举报，一经查实，本站将立刻删除。